吵吵   2011-03-03  阅读:7,226

摘要:目的:探究究影响家兔尿生成的因素,以及尿生成的过程。初步探究肾急性缺血时各项指标的变化,以及缺血再灌注损伤后肾功能的变化。方法:观察家兔静脉分别注射大量生理盐水和高渗葡萄糖溶液时尿量的变化。夹闭家兔肾动脉15min,造成家兔急性肾缺血,松开后得到家兔的肾缺血再灌注损伤的模型。观察家兔在家兔在正常和肾再灌注损伤情况下的尿量,用分光光度计测量尿液的尿肌酐浓度,计算内生肌酐清除率。结果:静脉注射大量生理盐水后,家兔尿量增大。静脉注射大量高渗葡萄糖溶液后家兔尿量增多。家兔肾缺血再灌注损伤后,尿量减少,尿肌酐生成增多,内生肌酐清除率下降。结论:注射生理盐水使血容量增加后尿量增多。注射高渗葡萄糖溶液使血糖浓度超过肾糖阀会使尿量增多。家兔肾缺血再灌注损伤后,内生肌酐清除率下降。

关键词:尿生成影响因素、肾缺血再灌注损伤、尿肌酐浓度、内生肌酐清除率

尿生成的过程包括:肾小管的滤过,肾小管和集合管的重新收和分泌。凡是影响尿生成过程的因素均可以引起尿量的变化和质的变化【1】。本实验通过改变尿生成过程中血浆胶体渗透压和肾血流量来研究影响尿生成过程的因素。肌酐是肌酸的代谢产物,把若干毫升血浆中的内生肌酐全部清除出去,称为内生肌酐清除率(Ccr)。内生肌酐清除率试验,可反映肾小球滤过功能和粗略估计有效肾单位的数量,故为测定肾损害的定量试验【2】www.chaochaoblog.com

1 材料与方法

1.1材料:

1.11手术器械和仪器:家兔手术台,注射器和针头,止血钳,粗剪,组织剪,动脉夹,眼科镊,手术线,固定绳,纱布,试管,输尿管插管,PcLab数据采集系统,恒温水浴锅,分光广度仪,动静脉插管,三通管。

1.12药品和试剂:20%乌拉坦,38生理盐水,0.1%肝素,20%葡萄糖溶液,局麻药普鲁卡因。

1.13实验动物:家兔一只,体重1.8kg,南方医科大学实验动物中心提供。

1.2方法

1.21动物麻醉:称量家兔的体重,按照体重计算麻药剂量。用20%乌拉坦耳缘静脉注射麻醉。快速推注前1/3,然后减速缓慢推注。注意观察动物呼吸、角膜放射。待家兔角膜放射消失,肌肉松弛后仰卧固定在手术台上。

1.22备皮:用粗剪刀剪去家兔颈部和左肋下缘处的兔毛。

1.23动静脉插管:沿家兔颈部正中线剪开皮肤越6cm,钝性分离出右侧的颈静脉后,插入预先充好肝素的静脉插管;分离出左颈动脉,插入和PcLab数据采集系统相连接的动脉插管。固定后记录电脑返回的数据。

1.24输尿管插管:改动物为右侧卧位,固定。沿着左肋下2~3cm,前斜行切口5cm。剪开肌肉后,找到肾脏,分离输尿管后像肾脏方向插入尿管插管。固定好插管后,用止血钳夹闭手术开口,将家兔恢复仰卧体位。计时收集尿液,并取0.5ml测量尿肌酐浓度。

1.25生理尿量调节:静脉输30ml生理盐水,观察尿量变化;静脉输10ml 20%葡萄糖,观察尿量变化 。 

1.25肾缺血再灌注:分离左肾动脉,夹闭15 or 30min。松开夹闭的肾动脉。使用生理盐水19ml + 速尿1 ml进行抢救。15min后观察记录尿量变化。计时收集尿液,并取0.5ml测量尿肌酐浓度。

1.26测量尿肌酐浓度:取尿液10μl与2ml蒸馏水按1:200比例稀释。按照表一所示加入试剂后测量OD值,计算尿肌酐浓度:

表一 尿肌酐测定试剂表

加样(ml) 标准管 测定管 空白管
测试样品上清   1.6  
试剂一(Cr标准品) 1.6    
蒸馏水     1.6
试剂三 0.5 0.5 0.5
试剂四 0.5 0.5 0.5

 

2 实验结果

2.1 尿量结果:

表二 尿量结果表

  正常 注射生理盐水 注射葡萄糖 缺血 缺血再灌注
量(ml/mini) 0.36 0.87 1.14 0 0.25

2.2尿肌酐OD值:

表三 尿肌酐OD值

  空白管OD值 标准管OD值 测定管OD值
正常尿标本 0.061 0.104 0.167
缺血再灌注损伤尿标本 0.060 0.104 0.165

2.3尿肌酐浓度和内生肌酐清除率:

肌酐(mmol/L) =(测定管OD – 空白管OD)/(标准管OD – 空白管OD ) x 标准品浓度 x 201

内生肌酐清除率(Ccr)=尿肌酐浓度/血肌酐浓度x 尿量(ml/min)

表四 尿肌酐浓度和内生肌酐清除率

  尿肌酐浓度(mmol/L) 内生肌酐清除率
正常尿标本 495 1730
缺血再灌注损伤尿标本 479 1050

3 讨论:

3.1静脉注射30ml生理盐水,尿量增加。

静脉快速注入大量生理盐水后,血浆蛋白被稀释,血浆胶体渗透压下降,肾小球滤过呀增加,肾小球血浆流量也增加,肾小球率过滤增加,尿量增多。另外,大量的生理盐水的注入时血容量增加,一直抗利尿激素的分泌,导致远曲小管和集合管上皮小包对水的重吸收减少,使得尿量增多。

3.2静脉注射高渗葡萄糖溶液,尿量增加。

原因是近曲小管对葡萄糖的重吸收有一定的限度,称为肾糖阀(160~180mg/ml)[3]。试验中葡萄糖的注射量已经超过了肾糖阀,小管液中就会有多余的葡萄糖没有被吸收,使小管也重溶质浓度增加,渗透压增加,妨碍了肾小管特别是近曲小管对水的重吸收,导致尿量增多。

3.3肾缺血再灌注后,尿量减少。

自由基的作用:肾缺血再灌注后氧自由基生成增多。生成的氧自由基将会对细胞有一系列的损害。包括对膜磷脂的损伤、对蛋白质的损伤、对核酸的破坏、对细胞外基质的破坏等;钙超载引起线粒体的功能障碍。白细胞进一步增多,引起一系列的血管障碍;高能磷酸化合物缺乏,使得ATP合成的前身物质减少;内皮素和血管紧张素的作用促进胞内钙超载、 PMN 聚集、粘附、氧自由基释放及内皮细胞自稳态失衡 。

所有的这些损伤将会导致肾细胞的线粒体高度肿胀、变形、嵴减少,排列紊乱,甚至线粒体崩解,空泡形成等。肾小球的滤过功能急剧下降,造成尿量的急剧减少。

3.4肾缺血再灌注后,内生肌酐清除率下降。

肌酐(creatinine,Cr)是肌肉在体内代谢的产物,对人来说大约每20g肌肉代谢可产生1mg肌酐。肌酐主要由肾小球滤过排出体外。血中肌酐来自外源性和内源性两种,外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物;内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。在肉类食物摄入量稳定时.机体的肌肉代谢又没有大的变化,肌酐的生成就会比较恒定。肾单位时间内,把若干毫升血浆中的内生肌酐全部清除出去,称为内生肌酐清除率(Ccr)。因此内生肌酐清除率试验,可反映肾小球滤过功能和粗略估计有效肾单位的数量。肾缺血再灌注后肾小球的滤过功能急剧下降,有效肾单位急剧减少。因此导致内生肌酐清除率下降。

参考文献

1.陈正宜. 谈谈影响尿生成的因素[J]. 生物学通报, 1985,(01)

2吴光华, 邹洁. 对血肌酐、尿素氮及内生肌酐清除率测定的某些看法[J]. 中国综合临床, 1988,(02)

3. 周丰,牟华,常志杰,岳春良,高东明,刘丽娟. 影响尿生成因素实验方法的探讨[J]. 锦州医学院学报, 1999,(03)

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2条回应:“影响尿生成因素和肾缺血再灌注损伤”

  1. Lysine说道:

    师兄好牛逼……

  2. 古馨蓓说道:

    美中不足就是有错别字

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